UTILIZAÇÃO DE BETA-CICLODEXTRINA PARA AUMENTO DA ESTABILIDADE CINÉTICA E TERMODINÂMICA DA BETA-TRIPSINA
Nome: IVIS MELIXA MUÑOZ FRANCO
Tipo: Dissertação de mestrado acadêmico
Data de publicação: 16/02/2023
Orientador:
Nome |
Papel |
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| ALEXANDRE MARTINS COSTA SANTOS | Orientador |
Banca:
| Nome |
Papel |
|---|---|
| ALEXANDRE MARTINS COSTA SANTOS | Orientador |
| KÁDIMA NAYARA TEIXEIRA | Examinador Externo |
| MARCO CESAR CUNEGUNDES GUIMARÃES | Examinador Interno |
Resumo: As ciclodextrinas são oligossacarídeos cíclicos que possuem o exterior polar e uma cavidade interna apolar. Elas são conhecidas por apresentarem a capacidade de promover estabilidade, aumentar solubilidade, carrear e encapsular substâncias como enzimas. Por tanto, este trabalho teve como intuito investigar se a adição de uma das ciclodextrinas, a beta-ciclodextrina, em um sistema contendo beta-tripsina provoca aumento na estabilidade enzimática, estrutural e termodinâmica da enzima. Para isto, foram realizados ensaios de atividade enzimática, espectrofotometría de varredura de ultravioleta, espectroscopia de varredura de fluorescência e microcalorimetria. O sistema beta-tripsina:beta-ciclodextrina 1:30 (massa/massa) com tempo de 10 minutos de interação apresentou a melhor relação de custo benefício (atividade enzimática por valor). Este sistema também apresentou os melhores resultados de armazenamento (3 horas, em 4oC ou 25oC). A espectrofotometria de varredura de ultravioleta não foi sensível para detectar alterações globais entre as proporções 1:30 e 1:0. Na espectroscopia de varredura de fluorescência a amostra 1:30 apresentou um comprimento de onda máximo 28 nm menor em relação às outras amostras, indicando que a presença de beta-ciclodextrina promoveu um aumento na estabilidade estrutural da enzima e no ensaio no microcalorímetro, foi observado um aumento de 2 K na temperatura em que 50% das moléculas estão desnaturadas, além de aumento nos parâmetros de variação na entropia, variação de entalpia calorimétrica e na variação de entalpia de Van't Hoff da amostra 1:30 em comparação a amostra 1:0, indicando que a presença da beta-ciclodextrina no sistema proteico promove o aumento do número de moléculas de beta-tripsina que estão no estado nativo, tornando o sistema mais estável termodinamicamente. Além disto, os índice de cooperatividade e a relação variação da entalpia calorimétrica sobre a variação da entalpia de Van't Hoff não foram alteradas. Portanto, os parâmetros estruturais, termodinâmicos e enzimáticos do sistema protéico foram melhorados devido a adição de beta-ciclodextrina na proporção 1:30, indicando que a beta-ciclodextrina aumentou a estabilidade da beta-tripsina.
